미백소재 탐색을 위한 SPR 기반의 MITF와 E-box 결합저해제 스크리닝을 위한 방법 개발

Title
미백소재 탐색을 위한 SPR 기반의 MITF와 E-box 결합저해제 스크리닝을 위한 방법 개발
Authors
손만기
Keywords
미백소재탐색을위한spr기반의mitf와ebox결합저해제스크리닝을위한방법개발
Issue Date
2012
Publisher
인하대학교
Abstract
피부색은 피부에 존재하는 멜라닌에 의해서 결정된다. Tyrosinase는 멜라닌 합성 과정에서 가장 중요한 역할을 하는 효소인데, MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) 라는 전사인자에 의해서 발현이 조절된다. MITF는 bHLH-Zip의 구조를 갖는 전사인자로 E-box (CATGTG) 라는 특정 염기 서열에 결합함으로써 유전자의 발현을 조절한다. 이번 실험에서는 MITF와 E-box의 결합을 저해하는 물질을 찾기 위해 만들어진 DNA칩을 이용하여 둘 사이의 결합을 분석하였다. 분석에는 SPR (surface plasmon resonance) 기술을 사용하였다. 이는 광학을 이용한 실시간 비표지 분석방법으로 금속 표면 위에 고정화되는 물질의 양을 측정하는 것이다. 대조군과의 비교 및 돌연변이와의 비교를 통하여 두 물질이 특이적으로 결합하는 것을 확인하였으며, 농도 변화에 따른 결합력의 차이를 분석하였다. 또한 이러한 실험을 통하여 실제로 저해제를 선별할 수 있는지 확인하였다. 이러한 연구는 추후 기존의 방법보다 빠르고 정확하게 피부미백제를 탐색하는데 활용될 것이다.
Description
Ⅰ. 요약 Ⅱ. ABSTRACT Ⅲ. CONTENTS 1. INTRODUCTION 1 1.1. Melanin synthesis process 1 1.2. PKA pathway in melanogenesis 3 1.3. 기존 연구 방법들의 문제점 5 1.4. Virtual screening system 6 1.5. Surface plasmon resonance 8 2. OBJECTIVES 10 3. MATERIALS AND METHODS 11 3.1. MITF 단백질의 발현 및 정제 11 3.2. E-box DNA oligomer의 합성 13 3.3. E-box DNA chip의 제작 15 3.4. Surface plasmon resonance analysis 16 4. RESULTS 17 4.1. Optimization of DNA hybridization 17 4.2. Specificity of MITF and E-box 18 4.2.1. Comparison of MBP and MBP-MITF 18 4.2.2. Comparison of E-box and mutant E-box 19 4.3. Kinetics of MITF and E-box 20 4.3.1. Single-cycle kinetics of MITF and E-box 20 4.3.2. Multi-cycle kinetics of MITF and E-box 22 4.4. Inhibitory effect of chemicals on MITF and E-box 24 5. CONCLUSIONS 25 6. REFERENCE 27
URI
http://dspace.inha.ac.kr/handle/10505/23640
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College of Natural Science(자연과학대학) > Ocean Sciences (해양과학) > Theses(해양과학 석박사 학위논문)
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