한라산 고산 습지의 담수에서 분리한 종속영양세균의 다양성

Title
한라산 고산 습지의 담수에서 분리한 종속영양세균의 다양성
Authors
최재희
Keywords
한라산고산습지의담수에서분리한종속영양세균의다양성
Issue Date
2012
Publisher
인하대학교
Abstract
고산습지는 종다양성이 높다고 여겨지고 있지만 세균의 다양성에 대한 연구는 많이 이루어지지 않고 있다. 본 연구에서는, 고산습지에 존재하는 세균들의 다양성을 조사하기 위해 한라산 고산습지의 토양과 담수시료에서 종속영양세균을 분리 및 배양한 뒤 16S rRNA 유전자 염기서열 분석을 수행하였으며, 일부 균주들에 대해서는 기초적인 생리학적 활성을 시험하였다. 평판배지 배양법을 통한 분리 및 배양 결과 총 666주의 종속영양세균이 확보되었으며, 16S rRNA 유전자 염기서열을 바탕으로 한 계통학적 분석 결과 이 중 558개의 균주가 Proteobacteria에 속하는 것으로 나타났다. Proteobacteria 중에서는 Betaproteobacteria가 가장 큰 비중을 차지하는 것으로 분석되었고 (44%), Gammaproteobacteria (29%)와 Alphaproteobacteria (11%)가 그 뒤를 이었다. Bacteroidetes는 전체 균주 중 15%를 차지하였고, Actinobacteria 와 Firmicutes가 각각 1%를 차지하였다. 전체 균주들 중 50주의 세균은 기존에 보고된 세균들과 97% 미만의 16S rRNA 유전자 염기서열 유사도를 나타내어 신분류군에 해당하는 것으로 분석되었다. 배양된 세균들의 구성을 보았을 때, 담수에서 흔히 발견되는 균주와 토양에서 흔히 발견되는 균주가 고루 분포되어 있었음을 확인할 수 있었으며, 이는 습지가 호수에서 육지로 전환하는 중간단계임을 보여주는 것으로 해석된다. 신분류군에 해당하는 균주들이 다수 분리된 것은 고산습지에 존재하는 세균의 다양성에 대한 연구가 좀 더 필요함을 보여 준 것으로 보인다.
Description
Ⅰ. 서론 1 Ⅱ. 재료 및 방법 3 1. 연구지역 및 시료채취 3 2. 분리 및 배양 3 3. 분자 생물학적 방법 5 3.1. Genomic DNA 추출 5 3.2. 16S rDNA 증폭 6 3.3. 제한효소 절편 길이 다형성 분석 7 3.4. 16S rRNA 유전자 염기서열 분석 및 계통학적 분석 8 3.4.1. 16S rRNA 유전자 염기서열의 확보 8 3.4.2. 16S rRNA 유전자 염기서열의 계통학적 분석 8 4. 신 분류군의 다상분류 11 4.1. 형태학적생리학적 특성 분석 11 4.1.1. 세포의 형태 관찰 11 4.1.2. 미생물의 효소학적 활성 관찰 11 4.1.3. Gram 반응 12 4.2. 화학분류학적 특성 분석 13 4.2.1. 지방산 (FAME, Fatty Acid Methyl Esters) 추출 및 분석 13 4.2.2. Pigments 13 Ⅲ. 결과 및 고찰 15 1. 균주의 분리 15 2. Genomic DNA 추출 및 16S rRNA 유전자의 증폭 15 3. 제한효소에 의한 16S rRNA 유전자 절편 분석 15 4. 한라산 고산습지 미생물의 군집 구조 18 5. 분리된 균주의 계통학적 분석 25 5.1. Alphaproteobacteria 25 5.2. Betaproteobacteria 27 5.2.1. 신종 후보균주 목록 29 5.3. Gammaproteobacteria 31 5.3.1. 신종 후보균주 목록 33 5.4. Bactroidetes 34 5.4.1. 신종 후보균주 목록 36 5.5. Firmicutes 와 Actinobacteria 37 5.5.1. 신종 후보균주 목록 39 Ⅳ. 결론 40 Ⅴ. 참고문헌 42
URI
http://dspace.inha.ac.kr/handle/10505/23416
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College of Natural Science(자연과학대학) > Biological Sciences (생명과학) > Theses(생명과학 석박사 학위논문)
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