MITF와 E-box 결합저해제의 미백제로서의 특성 규명

Title
MITF와 E-box 결합저해제의 미백제로서의 특성 규명
Authors
엄지민
Keywords
mitf와ebox결합저해제의미백제로서의특성규명
Issue Date
2011
Publisher
인하대학교
Abstract
피부색은 피부에 존재하는 멜라닌에 의해서 결정된다. 멜라닌 합성 과정 중에서 Tyrosinase, Tyrosinase related protein 1 (TRP1), Trysoinase related protein 2 (TRP2)와 같은 효소들이 중요한 역할을 한다고 알려져 있는데, 이 효소들은 MITF (Microphthalmia-associated transcription factor)라고 하는 전사인자에 의해서 발현이 조절된다. MITF는 bHLH-Zip의 구조를 갖는 전사인자로 E-box라는 특정 염기 서열을 인식하고 결합함으로써 여러 유전자들의 발현을 조절한다. 이번 실험에서는 MITF와 E-box의 결합을 저해하는 저해제를 찾기 위해 천연물 유래의 화합물 데이터베이스로부터 10개의 화합물을 선별하였다. 10개의 후보물질의 멜라닌 저해 효과를 확인하기 위해 두 종류의 멜라닌 세포(melanocyte)에 cell test를 하였으며, 그 결과 7번, 9번, 10번의 화합물을 선정하였다. 이 세 개의 후보물질을 이용하 EMSA (Electrophoretic mobility shift assay)를 수행한 결과 7번과 9번 화합물에 의해서 MITF와 E-box의 결합이 저해되는 것을 확인하였다. 이 후 7번과 9번 화합물을 이용해 western blot과 RT-PCR을 수행하여 MITF와 tyrosinase의 단백질 발현양과 mRNA의 양을 확인한 결과, 7번 화합물에 의해서 MITF의 발현양은 감소하지 않으면서 tyrosinase의 발현이 감소하는 것을 확인하였다. 반면, 9번 화합물에 의해서는 MITF와 tyrosinase의 발현이 모두 감소하였다. 따라서, 7번 화합물이 MITF와 E-box의 결합저해제로서 멜라닌 합성을 저해한다는 것을 알 수 있었다. 9번과 10번 화합물은 MITF와 E-box의 결합저해제라고 하기는 어렵지만 다른 mechanism에 의해서 멜라닌 합성을 저해한다고 생각된다. 결과적으로 7번 화합물은 MITF와 E-box의 결합저해제로서 멜라닌 합성을 저해할 수 있는 미백 기능성 소재로서 가능성이 있다고 생각된다.
Description
1. INTRODUCTION 1 1.1. Melanin synthesis 1 1.2. PKA pathway in melanogenesis 3 1.3. 기존 미백 기능성 원료와 그 문제점 5 1.4. MITF (Microphthalmia-associated transcription factor) 6 1.5. Screening system 7 2. OBJECTIVES 9 3. MATERIALS AND METHODS 10 3.1. 동물 세포 실험 10 3.1.1. 세포 및 시약 10 3.1.2. 세포 생존도 측정 실험 (MTT assay) 10 3.1.3. Melanin 양 측정 11 3.2. EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay ) 12 3.2.1. MBPek-MITF 12 3.2.2. Electrophoretic Mobility Shift Assay 12 3.3. Western blot 13 3.4. Reverse Transcription PCR 14 4. RESULTS 16 4.1. Skin cell test 16 4.2. EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay ) 19 4.2.1. EMSA: Competition Assay 19 4.2.2. EMSA: Inhibition of MITF E-box binding by candidates 21 4.3. Western blot 23 4.4. Reverse Transcription-PCR 25 5. CONCLUSIONS . 26 6. REFERENCE 28
URI
http://dspace.inha.ac.kr/handle/10505/22851
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College of Natural Science(자연과학대학) > Ocean Sciences (해양과학) > Theses(해양과학 석박사 학위논문)
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