전립선 세포주에서 UCH-L1의 EMT 유도를 통한 암전이 촉진에 대한 연구

Title
전립선 세포주에서 UCH-L1의 EMT 유도를 통한 암전이 촉진에 대한 연구
Authors
장민정
Keywords
전립선세포주에서uchl1의emt유도를통한암전이촉진에대한연구
Issue Date
2011
Publisher
인하대학교
Abstract
UCH-L1(Ubiquitin C-terminal hydrolse-L1)은 deubiquitinating enzyme(DUB) 으로 ubiquitin(ub) 전구체 또는 기질 단백질로부터 ub를 잘라낸다. 여러 조직에서 UCH-L1과 암 사이의 상관관계에 대해서는 많이 보고 되었지만 전립선 암세포에서 UCH-L1의 역할에 대해서는 아직 많은 연구가 이루어지지 않았다. 본 연구에서 나는 UCH-L1이 전이성 전립선 암세포주인 DU145에서 특히 많이 발현되는 반면 정상 또는 전이성이 약한 전립선 암세포에서는 그렇지 않은 것을 알아냈다. 전립선 암전이에서의 UCH-L1의 역할을 알아보기 위해 UCH-L1-knockdown DU145와 UCH-L1 또는 효소 활성부위를 변이시킨 UCH-L1 C90S를 각각 발현하는 RWPE1 stable cell을 만들었다. 특히, RWPE1에서의 UCH-L1의 발현은 암세포의 침투성과 전이의 주요 과정인 epithelial-to-mesenchymal transition (EMT)를 촉진하는 결과를 보였다. 이와는 반대로 DU145에서 UCH-L1의 knockdown은 EMT의 반대 과정인 MET를 유도했다. 또한, UCH-L1 level변화에 의해 야기된 이러한 EMT의 변화는 전립선 암세포의 이동성과 침투성에 영향을 준다. DU145에서 UCH-L1의 억제는 세포의 이동성과 침투성을 저해시키지만, RWPE1에서 UCH-L1의 발현은 세포의 이동성과 침투성을 증가시킨다. 뿐 만 아니라, 전립선 암세포에서 UCH-L1은 Akt pathway를 촉진시킨다. 이러한 결과들은 UCH-L1이 EMT 유도를 통해 전립선 암 전이를 촉진한다는 것과 UCH-L1이 부분적으로 Akt signaling pathway의 활성을 통해 EMT를 유도할 수 있다는 것을 나타내고 있다.
Description
목 차 1 List of Figures . 3 초 록 4 Abstract 5 서 론 6 1. Deubiquitinating Enzyme . 6 2. Ubiquitin C-terminal hydrolase-L1 6 3. Epithelial-Mesenchymal Transition 7 재료 및 방법 10 1. Cell lines and Cell culture . 10 2. Antibodies and immunoblotting. 10 3. Site-directed Mutagenesis . 11 4. Generation of stable shUCH-L1 cell line 11 5. Generation of stable UCH-L1 or UCH-L1 C90S cell line 11 6. Real time RT-PCR 12 7. Cell proliferation assay 13 8. Immunofluorescent staining 13 9. Propidium iodide (PI)-staining and fluorescent-activated cell scan(FACS) analysis 14 10. Wound Healing assay. 14 11. Transwell migration assay 14 12. In vivo invasion assay . 15 결 과 16 1. 전이성 전립선 암세포 DU145에서의 특이적 UCH-L1 과발현 . 16 2. 전립선 암세포에서 UCH-L은 세포 증식과 세포주기분포에 영향을 주지 않음 16 3. UCH-L1의 EMT(상피 중간엽 세포 이행) 유도 . 17 4. UCH-L1의 EMT promoting gene 유도 18 5. 전립선 암세포에서 UCH-L1의 세포 이동과 침투 촉진 . 19 6. UCH-L1에 의한 Akt signaling pathway의 활성화 . 20 고 찰 32 참고문헌 35
URI
http://dspace.inha.ac.kr/handle/10505/22523
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College of Natural Science(자연과학대학) > Biological Sciences (생명과학) > Theses(생명과학 석박사 학위논문)
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